产品说明书
产品用途、配制、操作与储存要求。
应用与检测原理
荧光随环境酸化增强。读数同时受抗体与试剂用量、内化量、局部 pH 和采集条件影响；比较实验时应保持配比、加样量和仪器设置一致。
- 1细胞表面结合细胞膜
- 2内吞进入细胞
- 3酸性区室酸性内体 / 溶酶体
抗体内化
比较靶标阳性和阴性样品，记录时间序列。结合抗体结合活性，判断荧光变化是否与受体介导的内化相关。
多色检测
按实际激发、发射峰和滤光片带宽安排通道。采用单染对照评估串色，避免把仪器自动增益变化当成样品差异。
技术参数
产品信息
- 产品名称
- pH630 Deep Red anti-human 标记试剂
- 货号
- QH-17-1003
- 产品形式
- 人源抗体标记试剂
- 反应或标记对象
- 适用的人源抗体
- 激发 / 发射峰
- 640 / 655 nm
- 包装规格
- 200 μl
配制与理化参数
- 制剂
- 液体制剂，0.5 mg/mL
- 储存条件
- −20°C 避光保存
- 试剂浓度
- 0.5 mg/mL
- 缓冲体系
- 10 mM PBS，pH 7.4，含 50% 甘油
使用方法
按专用说明书确认抗体适用性与标记条件。
01核对抗体与试剂适用性
核对人源抗体类型、制剂组分和检测体系，按本试剂的专用说明安排标记。
02建立结合与内化对照
设置未标记抗体、靶标阴性样品及试剂空白。先确认标记不会明显改变抗体结合，再比较内化。
03记录时间序列
保持样品处理和检测设置一致，记录荧光强度与胞内定位的变化，必要时增加酸化对照。
产品资料申请
点击所需资料，留下接收邮箱；申请 CoA 时请提供产品批号。
pH630 Deep Red anti-human 标记试剂QH-17-1003
批次分析证书（CoA）
对应批次的检验项目与结果。
安全数据表（SDS）
安全操作、储存及应急处置资料。
技术文章
相关文献
以下为方法与应用研究，所用试剂见各篇原文，不作为启和产品的验证数据。
Avelumab internalization by human circulating immune cells is mediated by both Fc gamma receptor and PD-L1 binding
Jin H, et al. · Oncoimmunology. 2021;10(1):1958590.
研究要点与应用
- 研究体系
- pHrodo 标记的 avelumab 及抗体变体，研究人血液免疫细胞中的摄取。
- 方法要点
- 区分 Fcγ 受体结合与 PD-L1 结合对抗体内化的贡献。
- 实验设计中的用途
- 涉及免疫细胞时，应考虑 Fc 相关摄取，不能把全部荧光归因于靶点。是否加入 Fc 阻断取决于研究目的。
Quantitative assessment of antibody internalization with novel monoclonal antibodies against Alexa fluorophores
Liao-Chan S, et al. · PLoS One. 2015;10(4):e0124708.
研究要点与应用
- 研究体系
- Alexa Fluor 标记的抗 EphA2 抗体，配合抗荧光团抗体淬灭细胞表面信号。
- 方法要点
- 通过区分表面与胞内信号，追踪抗体内化；不依赖酸性荧光增强。
- 实验设计中的用途
- 为摄取量与酸化变化提供互补验证思路。所用淬灭抗体针对 Alexa 荧光团，不应直接用于 pHrodo 染料。
Homogeneous plate based antibody internalization assay using pH sensor fluorescent dye
Nath N, et al. · J Immunol Methods. 2016;431:11–21.
研究要点与应用
- 研究体系
- pHAb 标记的曲妥珠单抗（HER2）与西妥昔单抗（EGFR），采用微孔板荧光读数。
- 方法要点
- 比较胺反应、巯基反应及染料/抗体比例对内化检测的影响。
- 实验设计中的用途
- 用于设计标记路线与结合活性的平行比较。论文中的比例属于其抗体和染料体系，不能直接作为所有产品的投料条件。
常见问题
哪些抗体可以使用这款 anti-human 试剂？
本品用于人源抗体标记。完整 IgG、抗体片段和不同亚型的适用性不能仅凭“anti-human”名称判断。申请资料时请提供抗体物种、亚型、片段形式和制剂组分，以便核对具体样品。
查看相关技术文章 →标记试剂可以直接加到细胞里吗？
应先按专用流程与待测抗体混合，再配成细胞检测工作液。同时设置不含待测抗体的试剂对照，以判断标记试剂自身带来的背景。
查看相关技术文章 →pH630 要用 630 nm 激发吗？
630 是系列名称。本品的激发/发射峰为 640/655 nm，检测时应核对实际激光线和远红发射滤光片。仅凭产品名称不能判断仪器是否匹配。
查看相关技术文章 →收到后需要加水复溶吗？
不需要。本品为 0.5 mg/mL、200 μL 液体制剂，使用前轻柔混匀，不要超声。按专用说明配制标记混合物，不能套用 TFP、NHS Ester 或 Maleimide 粉末染料的配液流程。
查看相关技术文章 →试剂中的甘油会带入细胞实验吗？
会。原液含 50% 甘油，配制工作液时应按稀释倍数核算最终含量。比较不同抗体时，尽量保持试剂加入比例和总体积一致，并用匹配的试剂对照检查背景及细胞状态。
查看相关技术文章 →液体试剂应该怎么保存？
在 −20°C 避光保存，避免反复冻融。开封后按说明书要求密封保存；原液储存要求不能直接作为稀释后工作液的保存期限。
检测信号弱，是否应该先增加用量？
先检查通道、抗体结合与细胞状态，并比较完整标记混合物和仅含标记试剂的对照。增加试剂可能同时增加背景；先明确弱信号来自抗体、标记体系还是检测条件。
查看相关技术文章 →荧光越强，就说明内化越多吗？
不一定。信号还受局部 pH、抗体与试剂用量和细胞数量影响。比较不同抗体时，应保持试剂配比一致，并核对结合活性；需要区分摄取和酸化时，增加独立的胞内定位或摄取读数。
查看相关技术文章 →染色后可以固定或通透吗？
不能默认固定后仍保留原来的 pH 读数。固定、通透和换液都可能改变标记物所在环境。若研究活细胞内化，优先在活细胞条件下检测；必须固定时，应先比较处理前后的响应和定位。
查看相关技术文章 →需要对应产品的操作说明？
申请说明书时，可附上抗体类型和检测需求。