蛋白标记计算器 — 启和生物 Qihe Biotech

蛋白标记计算器

计算 NHS 酯类荧光染料标记蛋白质所需的染料用量，并由 UV-Vis 吸光度算出实测标记比 (DOL)

输入参数

蛋白质分子量 (Da)

染料分子量 (Da)

参考值：Cy5-NHS ≈ 792, FITC ≈ 389

蛋白浓度 (mg/mL)

蛋白体积 (μL)

染料储液浓度 (mM)

常用 10 mM 溶于 DMSO

染料:蛋白摩尔比

填写参数后点击「计算」查看结果

标记比无法由投料摩尔比推算，只能在反应结束、除去游离染料后由吸收光谱测定。填齐下面五项即可算出。光程与稀释倍数在这个比值里会互相约掉，不需要填。

A₂₈₀（280 nm 吸光度）

A_max（染料 λmax 处吸光度）

染料消光系数 ε (M⁻¹cm⁻¹)

见产品页或 CoA；参考：AF 488 ≈ 73000、Cy5 ≈ 250000

染料 280 nm 校正因子 CF₂₈₀

染料在 280 nm 的吸收占其 λmax 的比例，见染料说明书；填 0 会让 DOL 偏低

蛋白消光系数 ε (M⁻¹cm⁻¹)

IgG 参考值 203000，其他蛋白按实际填写

填齐左侧五项后自动算出 DOL

蛋白量 (μmol) = 浓度 (mg/mL) × 体积 (μL) / 分子量 (Da)

所需染料 (μmol) = 蛋白量 (μmol) × 摩尔比

染料储液体积 (μL) = 所需染料 (μmol) / 储液浓度 (mM) × 1000

实测 DOL = (A_max × ε_蛋白) / ((A₂₈₀ − A_max × CF₂₈₀) × ε_染料)

注意：投料摩尔比只决定加多少染料，不等于标记比。实际 DOL 受缓冲液 pH、反应时间、蛋白活性等多种因素影响，以 UV-Vis 实测值为准。