TFP Ester · 伯胺标记
以伯胺标记抗体或蛋白，利用偶联物的酸性荧光增强观察内吞与酸化。
使用方法产品选型
2 个匹配产品
| 产品 / 货号 | 反应形式 | 激发峰 / nm | 发射峰 / nm | 包装规格 | 产品详情 |
|---|---|---|---|---|---|
| pH560 Red maleimide, Thiol ReactiveQH-17-1004 | Maleimide | 560 | 585 | 100 μg / 1 mg | |
| pH560 Red TFP Ester, Amine ReactiveQH-17-1005 | TFP Ester | 560 | 585 | 100 μg / 1 mg |
光谱与检测
荧光随环境酸化增强。读数同时受标记量、内化量、局部 pH 和采集条件影响；比较实验时应保持标记度和仪器设置一致。
- 参考产品
- pH560 Red TFP Ester, Amine Reactive QH-17-1005
- 激发 / 发射波长
- 560 / 585 nm
- 检测通道
- 按实际滤光片带宽安排通道，并使用单染对照评估串色。
应用与方法
pH560 Red TFP
+抗体 / 蛋白
→标记偶联物
参考货号 QH-17-1005
Maleimide · 游离巯基标记
与可接近的游离巯基偶联，适用于通过半胱氨酸标记蛋白的 pH 响应探针制备。
使用方法技术文章
pHrodo 抗体内化检测与产品选型
比较 pHAb、pH560 Red、pH630 Deep Red 与人源抗体配套标记试剂的检测通道和反应路线，结合样品状态安排内化检测。
NHS Ester 与 Maleimide 的抗体标记路线
NHS Ester 用于伯胺标记，马来酰亚胺用于游离巯基标记。结合抗体可用基团、缓冲液与还原处理，判断两种路线的适用条件，并列出标记前应提供的样品信息。
抗体标记度 DOL 的计算与评估
DOL 表示纯化后平均每个抗体结合的染料分子数。本文说明如何用 A280、染料吸光度和对应消光系数计算标记度，排查游离染料、错误校正和过度标记，并结合实际染色表现判断标记结果。
pHrodo 抗体内化的对照设计与读数分析
用对照区分靶向摄取、非特异摄取和酸化变化；明确荧光读数能回答的问题。
pHrodo 高背景与弱信号排查
按“无细胞响应—结合—细胞读数”定位问题，避免一开始就增加染料或抗体用量。
参考文献
以下为方法与应用研究，所用试剂见各篇原文，不作为启和产品的验证数据。
Intracellular Delivery and Trafficking Dynamics of a Lymphoma-Targeting Antibody–Polymer Conjugate
Berguig GY, et al. · Mol Pharm · 9(12):3506–3514 · 2012
结合比率荧光、成像与流式检测，分析标记分子经历的胞内酸度变化。
DOI: 10.1021/mp300338s
研究要点与应用
- 研究体系
- CD22 阳性细胞中的 HD39 抗体体系，使用 Alexa Fluor 488 与 pHrodo 双标记。
- 实验设计中的用途
- 适合了解参照通道与校准的作用。单通道强度或未经校准的双通道比值，都不能直接换算为绝对 pH。
Homogeneous plate based antibody internalization assay using pH sensor fluorescent dye
Nath N, et al. · J Immunol Methods · 431:11–21 · 2016
比较胺反应、巯基反应及染料/抗体比例对内化检测的影响。
DOI: 10.1016/j.jim.2016.02.001
研究要点与应用
- 研究体系
- pHAb 标记的曲妥珠单抗（HER2）与西妥昔单抗（EGFR），采用微孔板荧光读数。
- 实验设计中的用途
- 用于设计标记路线与结合活性的平行比较。论文中的比例属于其抗体和染料体系，不能直接作为所有产品的投料条件。
Avelumab internalization by human circulating immune cells is mediated by both Fc gamma receptor and PD-L1 binding
Jin H, et al. · Oncoimmunology · 10(1):1958590 · 2021
区分 Fcγ 受体结合与 PD-L1 结合对抗体内化的贡献。
DOI: 10.1080/2162402X.2021.1958590
研究要点与应用
- 研究体系
- pHrodo 标记的 avelumab 及抗体变体，研究人血液免疫细胞中的摄取。
- 实验设计中的用途
- 涉及免疫细胞时，应考虑 Fc 相关摄取，不能把全部荧光归因于靶点。是否加入 Fc 阻断取决于研究目的。
Quantitative assessment of antibody internalization with novel monoclonal antibodies against Alexa fluorophores
Liao-Chan S, et al. · PLoS One · 10(4):e0124708 · 2015
通过区分表面与胞内信号，追踪抗体内化；不依赖酸性荧光增强。
DOI: 10.1371/journal.pone.0124708
研究要点与应用
- 研究体系
- Alexa Fluor 标记的抗 EphA2 抗体，配合抗荧光团抗体淬灭细胞表面信号。
- 实验设计中的用途
- 为摄取量与酸化变化提供互补验证思路。所用淬灭抗体针对 Alexa 荧光团，不应直接用于 pHrodo 染料。
产品资料申请
点击所需资料，填写电话和邮箱；申请 CoA 时请提供产品批号。
pH560 Red TFP Ester, Amine Reactive
QH-17-1005
pH560 Red maleimide, Thiol Reactive
QH-17-1004