目标分子有什么基团？
伯胺对应 NHS，游离巯基比较 Maleimide；点击路线先核对反应搭配。
AF647 荧光染料
深红光区荧光标记，包含 5 种反应型染料与 4 种生物偶联物。按目标基团确定标记路线，配合 633/640 nm 红光激发及远红检测通道评估。
651nm
672nm
9
光学参数以 AF647 NHS 为参考。
AF647 NHS 光谱参考深红光
AF647 产品选型
按反应基团或识别配体查找 AF647 染料及偶联物。
需要哪一种识别配体？
比较 Annexin V、WGA、CTB、Streptavidin，并核对样品与使用条件。
| 产品 / 货号 | 反应形式 / 配体 | 标记对象与用途 | 产品资料 |
|---|---|---|---|
| AF647 NHS EsterQH-10-1011 | NHS | 抗体、蛋白等含可用伯胺的分子 | 查看产品 → |
| AF647 MaleimideQH-10-1011(Maleimide) | Maleimide | 目标分子含可用的游离巯基 | 查看产品 → |
| AF647 AzideQH-10-1011(Azide) | Azide | 目标分子带匹配的炔基，核对点击体系 | 查看产品 → |
| AF647-PEG4-DBCOQH-10-1011(DBCO PEG4) | PEG4-DBCO | 叠氮基团偶联，采用 PEG4 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF647-PEG12-DBCOQH-10-1011(DBCO PEG12) | PEG12-DBCO | 叠氮基团偶联，比较 PEG12 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF647-Annexin VQH-10-1011(Annexin V) | Annexin V | 识别暴露的 PS；结合依赖 Ca²⁺ | 查看产品 → |
| AF647 WGAQH-10-1011(WGA) | WGA | 识别含 GlcNAc 或唾液酸的糖链 | 查看产品 → |
| AF647 CTBQH-10-1011(CTB) | CTB | 识别 GM1；关注结合与内吞条件 | 查看产品 → |
| AF647-StreptavidinQH-15-1010 | Streptavidin | 已有生物素标记，使用链霉亲和素检测 | 查看产品 → |
显示 9 / 9 个 AF647 产品
光谱与检测条件
AF647 NHS 光学参数
- 参考产品
- AF647 NHS · QH-10-1011
- 激发峰
- 651 nm
- 发射峰
- 672 nm
- 摩尔消光系数
- 270,000 M⁻¹ cm⁻¹
光学数值参考本品参数；溶剂、pH 和偶联状态需结合具体测量资料确认。
查看本品完整参数 →633/640 nm 激发与 672 nm 附近收集
本品激发峰为 651 nm、发射峰为 672 nm。633 nm 或 640 nm 红光光源可作为匹配评估的起点，具体信号需结合吸收、功率、样品与光路确认。
670/30 带通滤片的标称窗口为 655–685 nm，包含 672 nm 峰位。请核对实际滤片与检测器响应；同名 APC 或 Cy5 通道在不同仪器上可能采用不同配置。
阅读通道匹配说明 →多色组合与对照
AF647、APC 与 Cy5 的远红收集窗口可能重叠。应使用与实际染料匹配的单染对照评估补偿或光谱解混，不能用 APC 对照代替 AF647，也不能仅按峰位差推断可以独立检测。
查看多色检测注意事项 →按目标基团安排标记流程
生物偶联物
已有识别配体时，可查看对应偶联物。它们的配方、用量与保存条件需按各产品资料确认。
| 产品 | 识别对象与条件 |
|---|---|
| AF647-Annexin V | 磷脂酰丝氨酸；结合依赖 Ca²⁺。 |
| AF647 WGA | 含 GlcNAc 或唾液酸的糖链；关注样品处理与胞内信号。 |
| AF647 CTB | GM1 神经节苷脂；用途与处理条件需单独核对。 |
| AF647-Streptavidin | 生物素化目标；注意游离生物素竞争。 |
参考文献
反应原理、实验设计与结果判读的方法文献。
用 NHS 酯对蛋白进行荧光标记
Nanda JS, Lorsch JR. · Methods in Enzymology · 536:87–94 · 2014
以 FAM 活性酯标记蛋白为例，介绍伯胺反应和标记效率评价。适合安排 NHS 标记流程，投料与反应条件需按实际染料和样品确定。
荧光标记抗体：平衡功能与标记度
Vira S, Mekhedov E, Humphrey G, Blank PS. · Analytical Biochemistry · 402(2):146–150 · 2010
以 FITC 标记抗 HA 抗体，比较标记度与抗原结合的变化。适合设计投料梯度及纯化后的功能评价，不能单凭 DOL 高低选择偶联物。
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
提供检测设置、对照及实验记录的方法参考，用于设计标记产物的下游评价。
定位型超分辨成像中荧光探针的性能评价
Dempsey GT, Vaughan JC, Chen KH, Bates M, Zhuang X. · Nature Methods · 8(12):1027–1036 · 2011
比较光开关、光子数与定位成像质量，适合了解超分辨探针的评价指标。常规激发、发射峰值不足以确定 STORM 成像表现。
DOI: 10.1038/nmeth.1768
技术文章
AF647 · 标记与检测AF647 光谱与检测通道AF647 NHS 峰位为 651/672 nm；检查红光光源、远红滤片和检测器响应。
红光激发
AF647 NHS 的激发峰为 651 nm，发射峰为 672 nm。633 nm 或 640 nm 激光是否提供足够信号，取决于该波长处的吸收、光源功率和样品浓度；无需只按名称寻找 647 nm 激光。
672 nm 附近的发射窗口
670/30 带通滤片标称覆盖 655–685 nm，包含 672 nm 峰位；660/20 覆盖 650–670 nm，两者收集的信号不同。核对实测发射光谱、滤片透过率和二向色镜，尤其不要仅按 APC 通道名称选滤片。
检测设置与对照
比较样品时固定光源、增益、曝光或驻留时间，并保留未染和单染对照。页面峰位示意不含实测带宽，补偿或解混需使用与样品处理一致的单染参考。
参考文献
Thermo Fisher · 红光激发与检测配置
documents.thermofisher.com
Thermo Fisher · 远红染料光源与滤片参考
tools.thermofisher.com
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
AF647 · 标记与检测AF647、APC 与 Cy5 通道分配APC、Cy5 与 AF647 的远红信号可能重叠；各标记需使用自己的单染参考。
通道名称与信号分离
仪器上的 APC 或 Cy5 通道通常是检测配置名称。AF647 能被该通道检测，不代表它能与同一样品中的 APC 或 Cy5 分开。安排多色实验时，列出全部标记及活死染料的光源和收集窗口。
使用对应染料的单染参考
AF647 补偿或解混应使用 AF647 单染参考，不能用 APC 代替。参考需匹配样品处理条件；若校正后仍不能可靠分离信号，应调整其中一个标记波段。
观察弱阳性群体
远红通道仍可能存在自发荧光、非特异结合和串色扩散。对低表达目标，滴定试剂并比较阳性群体与适用阴性对照的分离，避免只看阳性群体的平均强度。
参考文献
Thermo Fisher · 红光激发与检测配置
documents.thermofisher.com
Thermo Fisher · 远红染料光源与滤片参考
tools.thermofisher.com
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
按产品获取资料
说明书、SDS、产品参数和 CoA 按具体货号提供。请在对应产品页提交资料需求，CoA 申请需填写瓶签批号。
AF647 NHS Ester
QH-10-1011
AF647 Maleimide
QH-10-1011(Maleimide)
AF647 Azide
QH-10-1011(Azide)
AF647-PEG4-DBCO
QH-10-1011(DBCO PEG4)
AF647-PEG12-DBCO
QH-10-1011(DBCO PEG12)
AF647-Annexin V
QH-10-1011(Annexin V)
AF647 WGA
QH-10-1011(WGA)
AF647 CTB
QH-10-1011(CTB)
AF647-Streptavidin
QH-15-1010
光谱与产品选型咨询
提供目标分子、可用基团、缓冲配方、激发光源和发射窗口，便于确认产品形式及所需检测资料。
常见问题
AF647 是否必须用 647 nm 激光？
不必仅按产品名称决定。本目录 NHS 产品的激发峰为 651 nm、发射峰为 672 nm；633/640 nm 红光光源可结合具体吸收、功率与检测窗口评估，最终以样品信号和对照为准。
可以放在仪器的 APC 或 Cy5 通道吗？
先确认该通道的光源、滤片或扫描窗口。相近远红通道可作为评估起点，但通道名称并不定义统一配置；若样品同时带有 APC、Cy5 或其他远红标记，应单独评估信号分离。
不同品牌的 647 染料参数可以共用吗？
不同产品的结构、盐型、分子量、光学参数和反应条件可能不同。投料和标记度计算使用本品资料；已有其他品牌方法时，先做小量比较，不据相近名称承诺直接替换或相同性能。
NHS、Maleimide、Azide 与 DBCO 应怎样选？
伯胺对应 NHS，游离巯基对应 Maleimide；末端炔或应变炔目标可使用 Azide，叠氮目标对应 PEG4-DBCO 或 PEG12-DBCO。反应位点、样品前处理和纯化方案在各产品页分别说明。
能否据此用于 STORM 或活体成像？
常规光谱参数不能确认这些应用。STORM 需另行验证闪烁、光子产额和成像缓冲液；活体成像需评价目标分布、组织背景与相应实验条件。当前页面未提供本品在这些应用中的验证数据。
染料粉末和生物偶联物怎样保存？
本目录五款反应型染料为 −20°C、避光干燥保存；水溶液形式的 Annexin V、WGA、CTB 和 Streptavidin 偶联物按各自瓶签及产品页要求保存，不能直接沿用染料粉末条件。配制后溶液需单独确认。
如何获取分子量、说明书或批次 CoA？
在对应产品页的“产品资料”标签申请。NHS 与 Maleimide 的 CAS 分别按各自产品记录显示，不能据此借用其他形式的分子量。CoA 申请请提供准确货号和瓶签批号。