目标分子有什么基团？
伯胺对应 NHS，游离巯基比较 Maleimide；点击路线先核对反应搭配。
AF488 荧光染料
绿色荧光标记，包含 5 种反应型染料与 4 种生物偶联物。按目标基团确定标记路线，配合 488 nm 激发及绿色检测通道评估。
494nm
517nm
9
光学参数以 AF488 NHS 为参考。
AF488 NHS 光谱参考绿光
AF488 产品选型
按反应基团或识别配体查找 AF488 染料及偶联物。
需要哪一种识别配体？
比较 Annexin V、WGA、CTB、Streptavidin，并核对样品与使用条件。
| 产品 / 货号 | 反应形式 / 配体 | 标记对象与用途 | 产品资料 |
|---|---|---|---|
| AF488 NHS EsterQH-10-1004 | NHS | 抗体、蛋白等含可用伯胺的分子 | 查看产品 → |
| AF488 MaleimideQH-10-1004(Maleimide) | Maleimide | 目标分子含可用的游离巯基 | 查看产品 → |
| AF488 AzideQH-10-1004(Azide) | Azide | 目标分子带匹配的炔基，核对点击体系 | 查看产品 → |
| AF488-PEG4-DBCOQH-10-1004(DBCO PEG4) | PEG4-DBCO | 叠氮基团偶联，采用 PEG4 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF488-PEG12-DBCOQH-10-1004(DBCO PEG12) | PEG12-DBCO | 叠氮基团偶联，比较 PEG12 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF488-Annexin VQH-10-1004(Annexin V) | Annexin V | 识别暴露的 PS；结合依赖 Ca²⁺ | 查看产品 → |
| AF488 WGAQH-10-1004(WGA) | WGA | 识别含 GlcNAc 或唾液酸的糖链 | 查看产品 → |
| AF488 CTBQH-10-1004(CTB) | CTB | 识别 GM1；关注结合与内吞条件 | 查看产品 → |
| AF488-StreptavidinQH-15-1004 | Streptavidin | 已有生物素标记，使用链霉亲和素检测 | 查看产品 → |
显示 9 / 9 个 AF488 产品
光谱与检测条件
AF488 NHS 光学参数
- 参考产品
- AF488 NHS · QH-10-1004
- 激发峰
- 494 nm
- 发射峰
- 517 nm
- 摩尔消光系数
- 73,000 M⁻¹ cm⁻¹
光学数值参考本品参数；溶剂、pH 和偶联状态需结合具体测量资料确认。
查看本品完整参数 →488 nm 激发与绿色检测通道
488 nm 蓝光激光器是可评估的激发光源；517 nm 发射峰处于绿色区域。激光颜色与荧光发射颜色表示不同环节。
530/30 带通滤片的标称窗口为 515–545 nm。请结合实际滤片、二向色镜、检测器响应与单染对照确认，而非仅看通道名称。
阅读通道匹配说明 →按目标基团安排标记流程
生物偶联物
已有识别配体时，可查看对应偶联物。它们的配方、用量与保存条件需按各产品资料确认。
| 产品 | 识别对象与条件 |
|---|---|
| AF488-Annexin V | 磷脂酰丝氨酸；结合依赖 Ca²⁺。 |
| AF488 WGA | 含 GlcNAc 或唾液酸的糖链；关注样品处理与胞内信号。 |
| AF488 CTB | GM1 神经节苷脂；用途与处理条件需单独核对。 |
| AF488-Streptavidin | 生物素化目标；注意游离生物素竞争。 |
参考文献
反应原理、实验设计与结果判读的方法文献。
用 NHS 酯对蛋白进行荧光标记
Nanda JS, Lorsch JR. · Methods in Enzymology · 536:87–94 · 2014
以 FAM 活性酯标记蛋白为例，介绍伯胺反应和标记效率评价。适合安排 NHS 标记流程，投料与反应条件需按实际染料和样品确定。
荧光标记抗体：平衡功能与标记度
Vira S, Mekhedov E, Humphrey G, Blank PS. · Analytical Biochemistry · 402(2):146–150 · 2010
以 FITC 标记抗 HA 抗体，比较标记度与抗原结合的变化。适合设计投料梯度及纯化后的功能评价，不能单凭 DOL 高低选择偶联物。
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
提供检测设置、对照及实验记录的方法参考，用于设计标记产物的下游评价。
技术文章
AF488 · 标记与检测AF488 光谱与检测通道494/517 nm 是 AF488 NHS 的激发/发射峰；488 nm 激光与发射滤片需分别核对。
激发峰与光源
AF488 NHS 的激发峰为 494 nm，发射峰为 517 nm。488 nm 蓝光激光器接近激发峰；检测信号还受该波长处的吸收、光源功率和样品浓度影响。产品名中的 488 不等于实测激发峰。
发射滤片的收集范围
530/30 带通滤片的标称范围为 515–545 nm，包含 517 nm 峰位。选择滤片时，同时检查二向色镜和相邻染料在该窗口的信号。较宽窗口可收集更多发射，也可能增加串色和背景。
用对照确认设置
用未染与单染样品检查背景和信号，比较时保持增益或曝光一致。页面峰位图不能用来计算补偿或预测亮度；补偿或解混应使用实测单染参考。
参考文献
Thermo Fisher · 检测通道参考
documents.thermofisher.com
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
AF488 · 标记与检测AF488、GFP 与 FITC 通道区分AF488、GFP 与 FITC 可进入同一绿色窗口，不能仅凭名称不同安排为三个独立指标。
检查已有绿色标记
若样品已表达 GFP 或使用 FITC 标记，新增 AF488 可能在同一通道形成混合信号。先列出各标记的光谱和检测窗口；单个常规绿色通道无法分别定量这些来源。
判断是否需要更换波段
使用未染和各标记的单染对照，检查实际信号分离。补偿或光谱解混不能自动解决高度相近光谱的分离问题。若目标信号无法稳定区分，应将其中一个标记移至更远波段。
参考文献
Thermo Fisher · 检测通道参考
documents.thermofisher.com
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
标记指南
阅读指南 →NHS 与 Maleimide 标记路线
NHS 对应伯胺，Maleimide 对应游离巯基；样品添加物和还原处理决定前处理要求。
标记指南
阅读指南 →Azide 与 DBCO 点击反应配对
末端炔与 Azide 采用 CuAAC；DBCO 与叠氮采用无铜 SPAAC。
标记指南
阅读指南 →AF488 标记产物评价
纯化后同时比较标记度、样品回收、特异信号和背景，避免用总荧光判断效果。
FITC、AF488 与 SF488 检测与性能评价
区分通道匹配、信号强度、光漂白和 pH 响应。
按产品获取资料
说明书、SDS、产品参数和 CoA 按具体货号提供。请在对应产品页提交资料需求，CoA 申请需填写瓶签批号。
AF488 NHS Ester
QH-10-1004
AF488 Maleimide
QH-10-1004(Maleimide)
AF488 Azide
QH-10-1004(Azide)
AF488-PEG4-DBCO
QH-10-1004(DBCO PEG4)
AF488-PEG12-DBCO
QH-10-1004(DBCO PEG12)
AF488-Annexin V
QH-10-1004(Annexin V)
AF488 WGA
QH-10-1004(WGA)
AF488 CTB
QH-10-1004(CTB)
AF488-Streptavidin
QH-15-1004
光谱与产品选型咨询
提供目标分子、可用基团、缓冲配方、激发光源和发射窗口，便于确认产品形式及所需检测资料。
常见问题
AF488 名称中的 488 是否就是激发峰？
AF488 是产品系列名称。本页所列 NHS 产品的激发峰为 494 nm，发射峰为 517 nm；488 nm 则是常见激光器波长。产品名称、激发峰和光源波长需要分别核对。
可以直接替换其他品牌的 488 染料吗？
相近波段可作为选型起点，但不能据此认为结构、盐型、分子量、溶解度或反应表现相同。更换产品时重新核对货号参数，并以小量试验评价标记、纯化和功能。
NHS、Azide 和 DBCO 可以直接互换吗？
它们针对不同目标基团。NHS 对应伯胺，Maleimide 对应游离巯基，Azide 对应末端炔或应变炔，DBCO 对应叠氮。先确认目标基团，再进入对应产品页查看方法。
所有 AF488 产品都可以在 −20°C 保存吗？
反应型染料与生物偶联物的保存要求不同。本目录反应型染料为 −20°C、避光干燥保存；水溶液形式的生物偶联物应按其产品页和瓶签要求保存。配制后溶液需单独确认。
峰位图可以用来计算补偿吗？
本图仅标示激发与发射峰位，不包含实测带宽与仪器响应。补偿或解混应使用适用的单染对照和仪器流程；需要原始光谱时请说明产品、溶剂及检测用途。
产品说明书和 CoA 在哪里申请？
进入对应产品页的“产品资料”标签申请说明书、SDS 或参数。批次 CoA 需要准确货号和瓶签批号；总览页可用于确认产品形式与检测需求。