目标分子有什么基团？
伯胺对应 NHS，游离巯基比较 Maleimide；点击路线先核对反应搭配。
AF405 荧光染料
AF405 荧光染料，NHS 参考峰位为 400/424 nm，包含 5 种反应性衍生物与 4 种生物偶联物，可按标记对象和反应基团选型。
400nm
424nm
9种
光学参数以 AF405 NHS 为参考。
AF405 NHS 光谱参考紫光
AF405 产品选型
按反应基团或识别配体查找 AF405 染料及偶联物。
需要哪一种识别配体？
比较 Annexin V、WGA、CTB、Streptavidin，并核对样品与使用条件。
| 产品 / 货号 | 反应形式 / 配体 | 标记对象与用途 | 产品资料 |
|---|---|---|---|
| AF405 NHS EsterQH-10-1002 | NHS | 抗体、蛋白等含可用伯胺的分子 | 查看产品 → |
| AF405 MaleimideQH-10-1002(Maleimide) | Maleimide | 目标分子含可用的游离巯基 | 查看产品 → |
| AF405 AzideQH-10-1002(Azide) | Azide | 目标分子带匹配的炔基，核对点击体系 | 查看产品 → |
| AF405-PEG4-DBCOQH-10-1002(DBCO PEG4) | PEG4-DBCO | 叠氮基团偶联，采用 PEG4 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF405-PEG12-DBCOQH-10-1002(DBCO PEG12) | PEG12-DBCO | 叠氮基团偶联，比较 PEG12 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF405-Annexin VQH-10-1002(Annexin V) | Annexin V | 识别暴露的 PS；结合依赖 Ca²⁺ | 查看产品 → |
| AF405 WGAQH-10-1002(WGA) | WGA | 识别含 GlcNAc 或唾液酸的糖链 | 查看产品 → |
| AF405 CTBQH-10-1002(CTB) | CTB | 识别 GM1；关注结合与内吞条件 | 查看产品 → |
| AF405-StreptavidinQH-15-1002 | Streptavidin | 已有生物素标记，使用链霉亲和素检测 | 查看产品 → |
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AF405 · SERIES GUIDE
光谱与检测条件
AF405 NHS 光学参数
- 参考产品
- AF405 NHS Ester · QH-10-1002
- 激发峰 Ex / 发射峰 Em
- 400 / 424 nm
- 摩尔消光系数 ε
- 35,000 M⁻¹·cm⁻¹
- 测量介质、pH、对象状态
- 请联系技术支持
- 光谱类型
- 激发与发射峰位示意
示意图用于波段定位。计算串色、激发效率或相对亮度，需要对应条件下的实测光谱。
仪器匹配
1
激发光源
AF405 NHS 的激发峰为 400 nm。请同时核对仪器光源、激发光谱与发射收集窗口。
2
发射收集窗口
记录滤光片中心与带宽，或实际收集范围。424 nm 的发射峰用于定位，收集到多少信号还需结合实测曲线和光路。
3
样品与多色组合
列出其他荧光标记、样品本底与对照；用实际偶联物评价信号、背景和通道间影响。
按检测方式准备信息
检测通道配置
先整理型号、光源、滤光片和样品条件，再逐项核对。
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AF405 应用与标记方法
蛋白、抗体与含反应基团的分子
先检查可用伯胺或巯基、样品纯度及保存液，再决定 NHS 或 Maleimide 路线。位点需求应在标记前明确。
比较两条标记路线 →已有叠氮或匹配炔基的分子
先明确两端的反应基团，再比较 Azide、DBCO 与 PEG 间隔臂。反应体系和目标分子耐受性需一起考虑。
使用现成生物偶联物
按照识别配体定位产品，确认检测对象、样品处理、工作浓度与对照，无需自行进行染料偶联。
实验设计与检测
| 阶段 | 需要解决的问题 | 继续阅读 |
|---|---|---|
| 确定标记形式 | 可用的反应基团是什么？需要自行标记还是使用偶联物？ | 按任务找产品 → |
| 核对样品条件 | 完整保存液、添加物、可用量与纯化要求是否清楚？ | NHS 样品准备 → |
| 执行与评价偶联 | 怎样记录投料、分离游离染料并评价分子功能？ | NHS 标记流程 → |
| 配置检测实验 | 光源、收集窗口、其他染料与对照怎样配合？ | 核对光谱与检测 → |
PEG4 与 PEG12 间隔臂
两种产品都提供 DBCO 反应形式，PEG 间隔臂长度不同。比较时明确目标分子的空间可接近性、连接方式与后续检测用途；链长不能单独决定最终表现。
如需要判断哪种形式更适合，保持样品、反应与检测设置一致，记录产物回收、背景和实际功能，再评价差异。
参考文献
反应原理、实验设计与结果判读的方法文献。
用 NHS 酯对蛋白进行荧光标记
Nanda JS, Lorsch JR. · Methods in Enzymology · 536:87–94 · 2014
以 FAM 活性酯标记蛋白为例，介绍伯胺反应和标记效率评价。适合安排 NHS 标记流程，投料与反应条件需按实际染料和样品确定。
荧光标记抗体：平衡功能与标记度
Vira S, Mekhedov E, Humphrey G, Blank PS. · Analytical Biochemistry · 402(2):146–150 · 2010
以 FITC 标记抗 HA 抗体，比较标记度与抗原结合的变化。适合设计投料梯度及纯化后的功能评价，不能单凭 DOL 高低选择偶联物。
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
提供检测设置、对照及实验记录的方法参考，用于设计标记产物的下游评价。
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技术文章
01 选反应路线02 核对检测通道03 准备 NHS 实验
NHS 与 Maleimide 标记路线
NHS 对应伯胺，Maleimide 对应游离巯基；样品添加物和还原处理决定前处理要求。
仪器与选型AF405 光谱与检测通道AF405 NHS 峰位为 400/424 nm；检查 405 nm 光源、424 nm 附近的收集窗口及相邻通道串色。技术指南 · 展开阅读
光源与发射窗口
AF405 NHS 的激发峰为 400 nm，发射峰为 424 nm。405 nm 光源接近激发峰；还需检查发射滤片对 424 nm 附近信号的收集，以及光路对激发光的阻挡。通道名称不能代替具体波长和带宽。
相邻蓝光标记的串色
样品同时使用 AF350、DAPI 或其他蓝光标记时，测量每种单染样品在全部相关通道的信号。用未染样品确定本底，再按仪器流程进行补偿或解混；信号无法可靠分离时调整染料组合。
更换波段后的比较
改用 AF488 或 AF647 时，重新核对光源、滤片及工作浓度。按相同目标用量比较特异信号和背景，并记录各自检测设置；不同通道的原始强度不能直接用于染料亮度排名。
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产品资料与技术支持
申请产品文件请提供货号；查询 CoA 还需提供瓶签批号。
AF405 各产品资料
AF405 CTB
QH-10-1002(CTB)
AF405 WGA
QH-10-1002(WGA)
AF405-Annexin V
QH-10-1002(Annexin V)
AF405-PEG12-DBCO
QH-10-1002(DBCO PEG12)
AF405-PEG4-DBCO
QH-10-1002(DBCO PEG4)
AF405 Maleimide
QH-10-1002(Maleimide)
AF405 Azide
QH-10-1002(Azide)
AF405 NHS Ester
QH-10-1002
AF405-Streptavidin
QH-15-1002
| 资料类型 | 准备的信息 | 查看资料 |
|---|---|---|
| NHS 产品说明书或 SDS | 货号 QH-10-1002、文件类型与所需语言 | 申请 NHS 产品资料 → |
| 已购 NHS 产品的批次 CoA | 货号与瓶签批号；确认文件对应当前批次 | 质量与批次信息 → |
| NHS 的投料与配制参数 | 样品身份、浓度、体积、完整缓冲配方 | 技术参数 → |
| 反应前的方法准备 | 可用基团、样品处理限制、计划纯化方式 | 标记前检查与流程 → |
| 光谱或仪器匹配支持 | 具体产品、光源、滤光片、样品与多色组合 | 光谱与通道 → |
| 其他 AF405 衍生物或偶联物 | 产品名称与配体 / 反应基团 | 定位对应产品 → |
咨询所需信息
准备采购
产品名称 / 货号、规格数量、实验用途、期望到货时间。
准备实验
标记对象、可用量、完整保存液、纯化方式、仪器配置。
查询批次
瓶签批号、已有文件与版本、需要核对的具体项目。
还未确定具体反应形式？
把目标分子的基团和检测条件准备好，再确认产品与可提供资料。
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AF405 选型常见问题
AF405 与 AF405 NHS 是什么关系？
AF405 是这一组产品的染料名称；NHS、Maleimide、Azide、DBCO 或生物配体说明具体产品形式。每种形式有独立用途和资料，包装量在该产品详情中查看。
自行标记与购买生物偶联物，怎样判断？
已有需要标记的抗体、蛋白或其他分子时，先看其可用基团。希望直接使用特定识别配体时，比较相应偶联物，并确认它的样品条件与检测用途。
相同的 AF405 名称，能共用说明书和分子量吗？
反应基团、间隔臂与生物配体都会改变具体产品身份。应按货号取得分子量、配制和储存资料；批次 CoA 还需匹配实际批号。
有 405 nm 激光就可以确定能用吗？
AF405 NHS 的激发峰和发射峰为 400/424 nm。还需核对发射收集窗口和样品背景，并用实际样品及对照验证。
总览光谱能代表所有衍生物的实测曲线吗？
图中标示 AF405 NHS Ester 的激发与发射峰位。峰位不能表示光谱带宽；各衍生物及偶联物的实测光谱需分别确认。
PEG4 与 PEG12，是否越长越好？
间隔臂长度是选型变量之一。还要考虑连接对象、空间可接近性和产物表现，按实际实验比较，不能仅根据 PEG 数量作结论。
更换成 AF488 或 AF647，NHS 操作可以完全照搬吗？
可以沿用伯胺偶联的总体思路，但投料计算、适用条件、光学参数与检测配置要分别确认，并重新评价偶联物。