检测窗口与反应形式
FITC、启和 AF488 和 SF488 可作为绿色检测的候选。FITC 使用异硫氰酸酯基团,NHS 产品使用活性酯;更换试剂时按具体货号核对分子量、投料和反应条件。文中 AF488 指启和产品,原厂 Alexa Fluor 488 的参数需另行核对。
信号强度与光漂白
在相同目标浓度、相近标记度和一致的仪器设置下比较特异信号与阴性背景。耐光性需要在固定照明与曝光条件下连续采集;单次终点强度不能代表光漂白速率。
已有流式示例的读法
启和 Mouse CD4(GK1.5)示例在 0.4 µg/test 下,SF488 与启和 AF488 的 CD4+ 门内占比分别为 23.08% 和 20.59%。该数值表示事件比例,不是荧光强度;对照为启和 AF488,不能据此判断与原厂 Alexa Fluor 488 的亮度或耐光性差异。原始图见官网首页 SF 系列示例。
按实际环境评价
涉及酸性环境或连续成像时,使用对应产品的 pH 响应与光漂白数据。更换染料后的完整评价还包括回收率、特异结合、阴性背景和保存稳定性。