FITC、AF488 与 SF488 检测与性能评价

分别比较检测窗口、标记方式、信号强度、光漂白与 pH 响应。

检测窗口与反应形式

FITC、启和 AF488 和 SF488 可作为绿色检测的候选。FITC 使用异硫氰酸酯基团,NHS 产品使用活性酯;更换试剂时按具体货号核对分子量、投料和反应条件。文中 AF488 指启和产品,原厂 Alexa Fluor 488 的参数需另行核对。

信号强度与光漂白

在相同目标浓度、相近标记度和一致的仪器设置下比较特异信号与阴性背景。耐光性需要在固定照明与曝光条件下连续采集;单次终点强度不能代表光漂白速率。

已有流式示例的读法

启和 Mouse CD4(GK1.5)示例在 0.4 µg/test 下,SF488 与启和 AF488 的 CD4+ 门内占比分别为 23.08% 和 20.59%。该数值表示事件比例,不是荧光强度;对照为启和 AF488,不能据此判断与原厂 Alexa Fluor 488 的亮度或耐光性差异。原始图见官网首页 SF 系列示例。

按实际环境评价

涉及酸性环境或连续成像时,使用对应产品的 pH 响应与光漂白数据。更换染料后的完整评价还包括回收率、特异结合、阴性背景和保存稳定性。

参考文献

查看 SF 系列流式原图 →

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