目标分子有什么基团？
伯胺对应 NHS，游离巯基比较 Maleimide；点击路线先核对反应搭配。
AF350 荧光染料
蓝光发射，包含 5 种反应型染料与 4 种生物偶联物。紫外激发与蓝光收集，按目标基团查看标记方法与产品资料。
346nm
445nm
9
光学参数以 AF350 NHS 为参考。
AF350 NHS 光谱参考蓝光
AF350 产品选型
按反应基团或识别配体查找 AF350 染料及偶联物。
需要哪一种识别配体？
比较 Annexin V、WGA、CTB、Streptavidin，并核对样品与使用条件。
| 产品 / 货号 | 反应形式 / 配体 | 标记对象与用途 | 产品资料 |
|---|---|---|---|
| AF350 NHS EsterQH-10-1001 | NHS | 抗体、蛋白等含可用伯胺的分子 | 查看产品 → |
| AF350 MaleimideQH-10-1001(Maleimide) | Maleimide | 目标分子含可用的游离巯基 | 查看产品 → |
| AF350 AzideQH-10-1001(Azide) | Azide | 目标分子带匹配的炔基，核对点击体系 | 查看产品 → |
| AF350-PEG4-DBCOQH-10-1001(DBCO PEG4) | PEG4-DBCO | 叠氮基团偶联，采用 PEG4 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF350-PEG12-DBCOQH-10-1001(DBCO PEG12) | PEG12-DBCO | 叠氮基团偶联，比较 PEG12 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF350-Annexin VQH-10-1001(Annexin V) | Annexin V | 识别暴露的 PS；结合依赖 Ca²⁺ | 查看产品 → |
| AF350 WGAQH-10-1001(WGA) | WGA | 识别含 GlcNAc 或唾液酸的糖链 | 查看产品 → |
| AF350 CTBQH-10-1001(CTB) | CTB | 识别 GM1；关注结合与内吞条件 | 查看产品 → |
| AF350-StreptavidinQH-15-1001 | Streptavidin | 已有生物素标记，使用链霉亲和素检测 | 查看产品 → |
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光谱与检测条件
AF350 NHS 光学参数
- 参考产品
- AF350 NHS · QH-10-1001
- 激发峰
- 346 nm
- 发射峰
- 445 nm
- 摩尔消光系数
- 19,000 M⁻¹ cm⁻¹
光学数值参考本品参数；溶剂、pH 和偶联状态需结合具体测量资料确认。
查看本品完整参数 →紫外激发与蓝光收集
先核对仪器是否提供约 350 nm 的紫外激发光路，以及样品容器、物镜和光学元件在该区域的透过率。只有 405 nm 激光的仪器不能据蓝色发射就认定可用。
450/50 带通滤片的标称范围为 425–475 nm，包含本品 445 nm 发射峰。实际收集量取决于完整发射光谱、滤片透过率和检测器响应；该范围仅作滤片读数示例。DAPI 通道名称并不确定实际激发带宽；应同时检查紫外激发和蓝光收集两端。
阅读通道匹配说明 →多色组合与对照
AF350（445 nm）和 AF405（424 nm）的短波发射收集区域可能重叠，不能因激发源不同就忽略检测串色。若同时使用 DAPI 或其他核染料，按各激发光路记录单染信号，再决定通道组合。
查看多色检测注意事项 →按目标基团安排标记流程
生物偶联物
已有识别配体时，可查看对应偶联物。它们的配方、用量与保存条件需按各产品资料确认。
| 产品 | 识别对象与条件 |
|---|---|
| AF350-Annexin V | 磷脂酰丝氨酸；结合依赖 Ca²⁺。 |
| AF350 WGA | 含 GlcNAc 或唾液酸的糖链；关注样品处理与胞内信号。 |
| AF350 CTB | GM1 神经节苷脂；用途与处理条件需单独核对。 |
| AF350-Streptavidin | 生物素化目标；注意游离生物素竞争。 |
参考文献
反应原理、实验设计与结果判读的方法文献。
用 NHS 酯对蛋白进行荧光标记
Nanda JS, Lorsch JR. · Methods in Enzymology · 536:87–94 · 2014
以 FAM 活性酯标记蛋白为例，介绍伯胺反应和标记效率评价。适合安排 NHS 标记流程，投料与反应条件需按实际染料和样品确定。
荧光标记抗体：平衡功能与标记度
Vira S, Mekhedov E, Humphrey G, Blank PS. · Analytical Biochemistry · 402(2):146–150 · 2010
以 FITC 标记抗 HA 抗体，比较标记度与抗原结合的变化。适合设计投料梯度及纯化后的功能评价，不能单凭 DOL 高低选择偶联物。
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
提供检测设置、对照及实验记录的方法参考，用于设计标记产物的下游评价。
技术文章
AF350 · 标记与检测AF350 光谱与检测通道AF350 NHS 峰位为 346/445 nm；分别核对激发光源、发射窗口和检测器响应。
产品峰位与激发光源
AF350 NHS 的激发峰为 346 nm，发射峰为 445 nm。产品名称、光源波长和检测窗口应分别核对。先核对仪器是否提供约 350 nm 的紫外激发光路，以及样品容器、物镜和光学元件在该区域的透过率。只有 405 nm 激光的仪器不能据蓝色发射就认定可用。
发射窗口与光路核对
450/50 带通滤片的标称范围为 425–475 nm，包含本品 445 nm 发射峰。实际收集量取决于完整发射光谱、滤片透过率和检测器响应；该范围仅作滤片读数示例。DAPI 通道名称并不确定实际激发带宽；应同时检查紫外激发和蓝光收集两端。
用实测信号确认设置
页面峰位图不能用于比较亮度或计算补偿。用实测光谱检查滤片覆盖范围，再用未染和单染样品检查背景与信号。跨样品比较时固定增益或曝光，避免设置变化造成误判。
参考文献
AF350 · 标记与检测AF350 与 AF405 光谱比较相邻染料可能进入同一检测窗口；用单染结果检查交叉激发、串色和信号分离。
AF350 与 AF405 光谱比较
AF350（445 nm）和 AF405（424 nm）的短波发射收集区域可能重叠，不能因激发源不同就忽略检测串色。若同时使用 DAPI 或其他核染料，按各激发光路记录单染信号，再决定通道组合。
用实际对照确认分离
每种单染样品都在全部相关通道中测量，未染样品用于确定本底。常规流式据此设置补偿，光谱流式使用匹配染料和处理条件的参考解混。若校正后仍无法稳定区分目标信号，应调整染料组合或检测窗口。
相近波段产品比较
比较同一目标的不同染料偶联物时，匹配目标浓度与标记度，记录各自光源和滤片。某一通道测得更亮，可能源于更高激发或收集效率。选型同时看特异信号、背景、回收率和功能，不只看原始强度。
参考文献
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
Chroma · 滤光片与带宽定义
chroma.com
按产品获取资料
说明书、SDS、产品参数和 CoA 按具体货号提供。请在对应产品页提交资料需求，CoA 申请需填写瓶签批号。
AF350 NHS Ester
QH-10-1001
AF350 Maleimide
QH-10-1001(Maleimide)
AF350 Azide
QH-10-1001(Azide)
AF350-PEG4-DBCO
QH-10-1001(DBCO PEG4)
AF350-PEG12-DBCO
QH-10-1001(DBCO PEG12)
AF350-Annexin V
QH-10-1001(Annexin V)
AF350 WGA
QH-10-1001(WGA)
AF350 CTB
QH-10-1001(CTB)
AF350-Streptavidin
QH-15-1001
光谱与产品选型咨询
提供目标分子、可用基团、缓冲配方、激发光源和发射窗口，便于确认产品形式及所需检测资料。
常见问题
AF350 的名称、激发峰与发射峰是什么关系？
AF350 NHS 的激发峰为 346 nm，发射峰为 445 nm。产品名称、光源波长和检测窗口应分别核对。
AF350 可以直接放到 405 nm 通道吗？
需先确认 AF350 在该光源处的激发响应。AF350 的系列名称与蓝光发射不能代替激发条件；若仪器缺少紫外光路，可对比 AF405 并重新评价标记产物。
AF350 与相邻染料能否用于多色检测？
AF350（445 nm）和 AF405（424 nm）的短波发射收集区域可能重叠，不能因激发源不同就忽略检测串色。若同时使用 DAPI 或其他核染料，按各激发光路记录单染信号，再决定通道组合。
NHS、Maleimide、Azide 和 DBCO 怎样对应目标？
伯胺对应 NHS，游离巯基对应 Maleimide，末端炔或应变炔目标对应 Azide，叠氮目标对应 PEG4-DBCO 或 PEG12-DBCO。各反应形式的前处理、缓冲液和纯化要求见对应产品页。
反应型染料与生物偶联物能按同一条件保存吗？
请按每个产品页和瓶签分别保存。本目录反应型染料为 −20°C、避光干燥；水溶液偶联物有独立保存条件。配制后的染料溶液与新制偶联物不能直接沿用干粉储存条件。
可以借用同波段产品的分子量、CAS 或消光系数吗？
不应借用。不同反应形式、间隔臂、结构或盐型会影响这些参数；应按具体货号确认。页面未列出的化学身份和计算参数可在产品资料中申请，不能据相近名称推断。
怎样取得说明书、实测光谱与批次 CoA？
进入具体产品的“产品资料”标签，说明用途和检测条件。CoA 需提供货号及瓶签批号；页面光谱为峰位示意，文献为方法参考，不能作为本品批次检验结果。