目标分子有什么基团？
伯胺对应 NHS，游离巯基比较 Maleimide；点击路线先核对反应搭配。
AF546 荧光染料
黄光发射，包含 5 种反应型染料与 4 种生物偶联物。543/561 nm 激发评估与 570 nm 附近收集，按目标基团查看标记方法与产品资料。
554nm
570nm
9
光学参数以 AF546 NHS 为参考。
AF546 NHS 光谱参考黄光
AF546 产品选型
按反应基团或识别配体查找 AF546 染料及偶联物。
需要哪一种识别配体？
比较 Annexin V、WGA、CTB、Streptavidin，并核对样品与使用条件。
| 产品 / 货号 | 反应形式 / 配体 | 标记对象与用途 | 产品资料 |
|---|---|---|---|
| AF546 NHS EsterQH-10-1007 | NHS | 抗体、蛋白等含可用伯胺的分子 | 查看产品 → |
| AF546 MaleimideQH-10-1007(Maleimide) | Maleimide | 目标分子含可用的游离巯基 | 查看产品 → |
| AF546 AzideQH-10-1007(Azide) | Azide | 目标分子带匹配的炔基，核对点击体系 | 查看产品 → |
| AF546-PEG4-DBCOQH-10-1007(DBCO PEG4) | PEG4-DBCO | 叠氮基团偶联，采用 PEG4 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF546-PEG12-DBCOQH-10-1007(DBCO PEG12) | PEG12-DBCO | 叠氮基团偶联，比较 PEG12 间隔臂 | 查看产品 → |
| AF546-Annexin VQH-10-1007(Annexin V) | Annexin V | 识别暴露的 PS；结合依赖 Ca²⁺ | 查看产品 → |
| AF546 WGAQH-10-1007(WGA) | WGA | 识别含 GlcNAc 或唾液酸的糖链 | 查看产品 → |
| AF546 CTBQH-10-1007(CTB) | CTB | 识别 GM1；关注结合与内吞条件 | 查看产品 → |
| AF546-StreptavidinQH-15-1006 | Streptavidin | 已有生物素标记，使用链霉亲和素检测 | 查看产品 → |
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光谱与检测条件
AF546 NHS 光学参数
- 参考产品
- AF546 NHS · QH-10-1007
- 激发峰
- 554 nm
- 发射峰
- 570 nm
- 摩尔消光系数
- 112,000 M⁻¹ cm⁻¹
光学数值参考本品参数；溶剂、pH 和偶联状态需结合具体测量资料确认。
查看本品完整参数 →543/561 nm 激发评估与 570 nm 附近收集
可结合 543 或 561 nm 光源检查激发响应。两种光源与本品峰位的关系不同，切换仪器时应重新记录功率、增益和信噪比。
575/30 带通滤片的标称范围为 560–590 nm，包含本品 570 nm 发射峰。实际收集量取决于完整发射光谱、滤片透过率和检测器响应；该范围仅作滤片读数示例。561 nm 光源接近本例通带下沿，需要具备相应激光阻挡的实际滤片组，不能仅按通带数字选配。
阅读通道匹配说明 →多色组合与对照
AF546 与 AF555 的发射峰只相差 2 nm，通常应作为同一检测区域的候选产品比较。不要仅凭两个产品名将它们规划为常规双通道；比较标记回收率、功能、背景及稳定性。
查看多色检测注意事项 →按目标基团安排标记流程
生物偶联物
已有识别配体时，可查看对应偶联物。它们的配方、用量与保存条件需按各产品资料确认。
| 产品 | 识别对象与条件 |
|---|---|
| AF546-Annexin V | 磷脂酰丝氨酸；结合依赖 Ca²⁺。 |
| AF546 WGA | 含 GlcNAc 或唾液酸的糖链；关注样品处理与胞内信号。 |
| AF546 CTB | GM1 神经节苷脂；用途与处理条件需单独核对。 |
| AF546-Streptavidin | 生物素化目标；注意游离生物素竞争。 |
参考文献
反应原理、实验设计与结果判读的方法文献。
用 NHS 酯对蛋白进行荧光标记
Nanda JS, Lorsch JR. · Methods in Enzymology · 536:87–94 · 2014
以 FAM 活性酯标记蛋白为例，介绍伯胺反应和标记效率评价。适合安排 NHS 标记流程，投料与反应条件需按实际染料和样品确定。
荧光标记抗体：平衡功能与标记度
Vira S, Mekhedov E, Humphrey G, Blank PS. · Analytical Biochemistry · 402(2):146–150 · 2010
以 FITC 标记抗 HA 抗体，比较标记度与抗原结合的变化。适合设计投料梯度及纯化后的功能评价，不能单凭 DOL 高低选择偶联物。
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
提供检测设置、对照及实验记录的方法参考，用于设计标记产物的下游评价。
技术文章
AF546 · 标记与检测AF546 光谱与检测通道AF546 NHS 峰位为 554/570 nm；分别核对激发光源、发射窗口和检测器响应。
产品峰位与激发光源
AF546 NHS 的激发峰为 554 nm，发射峰为 570 nm。产品名称、光源波长和检测窗口应分别核对。可结合 543 或 561 nm 光源检查激发响应。两种光源与本品峰位的关系不同，切换仪器时应重新记录功率、增益和信噪比。
发射窗口与光路核对
575/30 带通滤片的标称范围为 560–590 nm，包含本品 570 nm 发射峰。实际收集量取决于完整发射光谱、滤片透过率和检测器响应；该范围仅作滤片读数示例。561 nm 光源接近本例通带下沿，需要具备相应激光阻挡的实际滤片组，不能仅按通带数字选配。
用实测信号确认设置
页面峰位图不能用于比较亮度或计算补偿。用实测光谱检查滤片覆盖范围，再用未染和单染样品检查背景与信号。跨样品比较时固定增益或曝光，避免设置变化造成误判。
参考文献
AF546 · 标记与检测AF546 与 AF555 光谱比较相邻染料可能进入同一检测窗口；用单染结果检查交叉激发、串色和信号分离。
AF546 与 AF555 光谱比较
AF546 与 AF555 的发射峰只相差 2 nm，通常应作为同一检测区域的候选产品比较。不要仅凭两个产品名将它们规划为常规双通道；比较标记回收率、功能、背景及稳定性。
用实际对照确认分离
每种单染样品都在全部相关通道中测量，未染样品用于确定本底。常规流式据此设置补偿，光谱流式使用匹配染料和处理条件的参考解混。若校正后仍无法稳定区分目标信号，应调整染料组合或检测窗口。
相近波段产品比较
比较同一目标的不同染料偶联物时，匹配目标浓度与标记度，记录各自光源和滤片。某一通道测得更亮，可能源于更高激发或收集效率。选型同时看特异信号、背景、回收率和功能，不只看原始强度。
参考文献
流式细胞术与细胞分选使用指南（第三版）
Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. · European Journal of Immunology · 51(12):2708–3145 · 2021
Chroma · 滤光片与带宽定义
chroma.com
按产品获取资料
说明书、SDS、产品参数和 CoA 按具体货号提供。请在对应产品页提交资料需求，CoA 申请需填写瓶签批号。
AF546 NHS Ester
QH-10-1007
AF546 Maleimide
QH-10-1007(Maleimide)
AF546 Azide
QH-10-1007(Azide)
AF546-PEG4-DBCO
QH-10-1007(DBCO PEG4)
AF546-PEG12-DBCO
QH-10-1007(DBCO PEG12)
AF546-Annexin V
QH-10-1007(Annexin V)
AF546 WGA
QH-10-1007(WGA)
AF546 CTB
QH-10-1007(CTB)
AF546-Streptavidin
QH-15-1006
光谱与产品选型咨询
提供目标分子、可用基团、缓冲配方、激发光源和发射窗口，便于确认产品形式及所需检测资料。
常见问题
AF546 的名称、激发峰与发射峰是什么关系？
AF546 NHS 的激发峰为 554 nm，发射峰为 570 nm。产品名称、光源波长和检测窗口应分别核对。
AF546 和 AF555 哪个更亮？
峰位和消光系数不足以决定实际标记信号。应在相同目标浓度、相近标记度和同一检测设置下比较，结合纯化回收、背景与功能作判断。
AF546 与相邻染料能否用于多色检测？
AF546 与 AF555 的发射峰只相差 2 nm，通常应作为同一检测区域的候选产品比较。不要仅凭两个产品名将它们规划为常规双通道；比较标记回收率、功能、背景及稳定性。
NHS、Maleimide、Azide 和 DBCO 怎样对应目标？
伯胺对应 NHS，游离巯基对应 Maleimide，末端炔或应变炔目标对应 Azide，叠氮目标对应 PEG4-DBCO 或 PEG12-DBCO。各反应形式的前处理、缓冲液和纯化要求见对应产品页。
反应型染料与生物偶联物能按同一条件保存吗？
请按每个产品页和瓶签分别保存。本目录反应型染料为 −20°C、避光干燥；水溶液偶联物有独立保存条件。配制后的染料溶液与新制偶联物不能直接沿用干粉储存条件。
可以借用同波段产品的分子量、CAS 或消光系数吗？
不应借用。不同反应形式、间隔臂、结构或盐型会影响这些参数；应按具体货号确认。页面未列出的化学身份和计算参数可在产品资料中申请，不能据相近名称推断。
怎样取得说明书、实测光谱与批次 CoA？
进入具体产品的“产品资料”标签，说明用途和检测条件。CoA 需提供货号及瓶签批号；页面光谱为峰位示意，文献为方法参考，不能作为本品批次检验结果。