WGA 固定与通透条件比较

固定和通透会改变糖链可接近性，需分别比较膜轮廓、胞内信号和背景。

WGA 与可接近糖链原理示意

AF–WGA

GlcNAc / Sia

糖链识别

虚线表示目标识别的非共价结合；形状为简化示意。 AF 色点表示通用染料符号。

分开比较固定与通透

使用同批细胞，先固定一个处理条件再比较另一个，保持 WGA 用量和采集设置一致。将未通透样品作为比较项，有助于区分表面染色与处理后暴露的胞内位点。

膜轮廓成像重点查看边界连续性、细胞脱落及胞内干扰；胞内糖链观察则检查目标区域与背景的分离。选择形态保存和目标信号均可接受的条件。

Chazotte B. · Cold Spring Harbor Protocols · 2011(5):pdb.prot5623 · 2011