链霉亲和素荧光检测与多价结合

链霉亲和素多价结合可能交联生物素化目标;活细胞运动与聚集研究需考虑这一影响。

Streptavidin 与生物素原理示意
AF–Streptavidin
Biotin
生物素亲和结合

虚线表示目标识别的非共价结合;形状为简化示意。 AF 色点表示通用染料符号。

多价结合与目标交联

常规链霉亲和素可同时结合多个生物素,可能引起目标交联。研究膜蛋白运动或聚集时,区分常规多价与工程化单价试剂,并比较探针加入前后的目标行为。

荧光强度的解释

荧光读数受目标的生物素化程度、结合量和光学设置影响。相同目标量下滴定荧光链霉亲和素,比较阳性与阴性样品的分离。报告探针用量和检测设置,避免将强度差异直接解释为目标数量变化。

参考文献

具有单一高亲和力结合位点的单价链霉亲和素

Howarth M, Chinnapen DJF, Gerrow K, et al. · Nature Methods · 3:267–273 · 2006

DOI: 10.1038/nmeth861

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