检查竞争物来源
核对生物素化反应后的小分子去除步骤，以及培养液、保存液和添加物中的生物素。游离生物素进入检测体系后可占据结合位点，仅增加荧光链霉亲和素用量不一定能解决问题。
排除样品损失的影响
采用适合目标大小的分离方法处理游离生物素，随后重测目标浓度。按相同目标用量比较处理前后信号，避免将纯化回收差异误判为结合变化。
区分目标上的生物素与游离生物素
保留目标上结合的生物素，并去除多余游离生物素化试剂及小分子生物素。纯化后应同时评价目标回收量；只有当小分子与目标在所用方法下能有效分开时，换液才具有可解释性。