区分小分子与载体蛋白
核对保存液中的缓冲剂、稳定剂和载体蛋白。Tris、甘氨酸含伯胺，可通过适合目标大小的换液方法去除。BSA、明胶本身也会被标记，应使用无载体样品或能分离目标蛋白的纯化方法。
按换液后的浓度计算
换液后重新测定浓度和回收体积，检查沉淀或聚集，再计算染料投料。保留一份经过相同换液处理的未标记样品，用于判断功能损失来自前处理还是标记。
NHS 标记前缓冲液检查
Tris、甘氨酸会消耗 NHS 染料；BSA、明胶需与目标蛋白分离，普通换液不能代替这一步。
AF–NHS
R–NH₂
酰胺连接
仅示意连接关系，未展示完整化学结构。 AF 色点表示通用染料符号。