Maleimide 标记前还原剂处理

DTT、β-巯基乙醇会竞争消耗 Maleimide;TCEP 残留也可能干扰反应。

Maleimide 与游离巯基原理示意
MALAF–Maleimide
R–SHR–SH
硫醚连接

仅示意连接关系,未展示完整化学结构。 AF 色点表示通用染料符号。

去除含巯基还原剂

DTT 和 β-巯基乙醇的巯基会与目标竞争染料。偶联前采用适合样品的脱盐或换液方法,随后复测回收量和游离巯基。记录换液至加染料的间隔,便于排查巯基再氧化。

核对 TCEP 残留

TCEP 不含巯基,但可与 Maleimide 反应。是否需要去除取决于残留浓度和已验证流程。无兼容性数据时,先比较去除前后的标记结果,不按“不含巯基”直接认定兼容。

还原剂处理记录

记录还原剂起始浓度、处理后体积、换液方法和加染料前的等待时间。DTT、β-巯基乙醇与 TCEP 采用不同的干扰判断;不要将脱盐等同于已完全去除 TCEP。

参考文献

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