去除含巯基还原剂
DTT 和 β-巯基乙醇的巯基会与目标竞争染料。偶联前采用适合样品的脱盐或换液方法,随后复测回收量和游离巯基。记录换液至加染料的间隔,便于排查巯基再氧化。
核对 TCEP 残留
TCEP 不含巯基,但可与 Maleimide 反应。是否需要去除取决于残留浓度和已验证流程。无兼容性数据时,先比较去除前后的标记结果,不按“不含巯基”直接认定兼容。
还原剂处理记录
记录还原剂起始浓度、处理后体积、换液方法和加染料前的等待时间。DTT、β-巯基乙醇与 TCEP 采用不同的干扰判断;不要将脱盐等同于已完全去除 TCEP。