用产物分析区分转化不足与检测偏差，用无叠氮对照排查吸附背景。
仅示意连接关系，未展示完整化学结构。 AF 色点表示通用染料符号。
检查目标叠氮、游离竞争物和染料溶解情况，纯化后测标记量与回收量。标记量正常而检测信号弱时，核对光源、滤片和工作浓度；标记量低时，再排查反应条件。
无叠氮的匹配样品按相同流程加染料并纯化。若仍有明显信号，优先检查残留染料和非特异吸附；比较工作浓度与洗涤条件时，保持曝光或增益一致，同时观察目标信号是否保留。
完整反应、无叠氮样品和未加染料样品采用相同处理与采集设置。阴性对照用于解释背景，不能代替产物组成分析。
| 对照结果 | 下一步 |
|---|---|
| 未加染料组已有信号 | 检查自发荧光、其他标记及仪器本底 |
| 无叠氮组纯化后仍有信号 | 检查染料残留或非特异吸附，比较纯化和洗涤条件 |
| 只有完整反应有信号 | 结合产物分离结果、平均标记量和功能测试判断标记 |
Agard NJ, Prescher JA, Bertozzi CR. · Journal of the American Chemical Society · 126(46):15046–15047 · 2004
DOI: 10.1021/ja044996f
Debets MF, van Berkel SS, Schoffelen S, et al. · Chemical Communications · 46(1):97–99 · 2010
DOI: 10.1039/b917797c
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