SPAAC 前样品与缓冲液检查

目标叠氮用于偶联；游离叠氮修饰试剂和叠氮化钠可能竞争消耗 DBCO。

PEG4-DBCO 与叠氮原理示意

AF–PEG4-DBCO

R–N₃

SPAAC 三唑连接

仅示意连接关系，未展示完整化学结构。 AF 色点表示通用染料符号。

确认目标上的叠氮

核对叠氮修饰记录及纯化结果。仅有伯胺或巯基的样品需先具备叠氮基团；目标若带 DBCO，则应使用 Azide 染料。

检查残留修饰试剂和保存液中的叠氮化钠。采用适合目标大小的纯化或换液方法去除后，重新测定目标浓度再计算投料。增加 DBCO 染料不能代替清除竞争物。

目标上的有机叠氮是计划连接的位点；保存液中的叠氮化钠属于游离竞争物。处理小分子后复测目标浓度。所需换液次数取决于起始浓度、样品体积和分离方法，不直接套用另一款试剂盒的固定次数。

Debets MF, van Berkel SS, Schoffelen S, et al. · Chemical Communications · 46(1):97–99 · 2010

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