确认炔基类型
查看目标修饰试剂的结构或说明书。末端炔与 Azide 染料反应需铜催化；DBCO 等应变炔可进行无铜 SPAAC。两个叠氮基团不能互相完成这类点击反应。
检查样品和后续检测
CuAAC 的铜、配体和还原体系可能影响样品或后续检测，需安排纯化并保留未加染料的处理对照。SPAAC 无需铜，但仍应检查修饰后的目标功能和游离染料去除情况。
CuAAC 与 SPAAC 路线选择
末端炔采用 CuAAC，应变炔采用 SPAAC；确认目标基团后再检查铜与样品的兼容性。
AF–N₃
C≡C / DBCO
三唑连接
末端炔采用 CuAAC，适用应变炔采用 SPAAC；形状为简化示意。 AF 色点表示通用染料符号。
参考文献
用于生物偶联的铜催化叠氮–炔基点击反应
Presolski SI, Hong VP, Finn MG. · Current Protocols in Chemical Biology · 3(4):153–162 · 2011
以应变促进的叠氮–炔基环加成修饰生物分子
Agard NJ, Prescher JA, Bertozzi CR. · Journal of the American Chemical Society · 126(46):15046–15047 · 2004
DOI: 10.1021/ja044996f