按分子大小安排纯化
蛋白与游离染料大小差异较大时，可评估脱盐或尺寸排阻分离；短肽和小分子产物需确认方法确实能分开两者。CuAAC 产物还应检查残留催化组分对下游检测的影响。
用对照定位背景
无炔基的匹配样品经过相同加染料和纯化流程，可显示吸附或残留造成的信号。未加染料样品用于检查本底。各组按相同目标浓度、曝光或增益比较。
点击标记后的纯化与背景评估
用无反应位点对照区分共价标记与吸附，纯化时同时处理游离染料和催化组分。
AF–N₃
C≡C / DBCO
三唑连接
末端炔采用 CuAAC，适用应变炔采用 SPAAC；形状为简化示意。 AF 色点表示通用染料符号。
参考文献
Lumiprobe · 核酸点击标记方法
lumiprobe.com
用于生物偶联的铜催化叠氮–炔基点击反应
Presolski SI, Hong VP, Finn MG. · Current Protocols in Chemical Biology · 3(4):153–162 · 2011