检查螯合剂残留
核对消化液、洗涤液和保存液是否含 EDTA 或其他钙螯合剂。最终使用含钙结合液，也不能忽略前一步带入的螯合剂。按产品说明完成样品转移，避免直接用普通无钙 PBS 替代结合液。
区分结合液问题与细胞状态
信号异常时，用处理方式一致的对照样品检查结合液，并同时查看膜完整性读数。若各组的细胞收集或等待时间不同，先排除这些差异，再解释 Annexin V 信号变化。
避免用加钙补偿未知残留
EDTA 与钙的有效浓度取决于带入体积和体系组成。优先按经过验证的流程去除残留螯合剂并转入结合液；不要在残留量不明时自行不断加钙。