DBCO
目标分子上可接近的叠氮基团
DBCO
应变炔R–N₃
叠氮基团三唑
SPAAC 连接DBCO 是应变炔，可与叠氮发生环加成。普通未修饰蛋白不具备这种配对位点；游离叠氮修饰试剂可能竞争消耗 DBCO。
BODIPY 581/591 染料总览
BODIPY 581/591 提供 WGA、DBCO、Maleimide、Azide、NHS Ester 产品，按标记或染色用途选型。
5 款产品
产品选型
5 个匹配产品
| 产品 / 货号 | 反应形式 | 激发峰 / nm | 发射峰 / nm | 包装规格 | 产品详情 |
|---|---|---|---|---|---|
| BODIPY581/591 Succinimidyl EsterQH-40-4006 | NHS Ester | 581 | 591 | 1 mg / 5 mg / 10 mg / 25 mg / 100 mg | |
| BODIPY581/591 MaleimideQH-40-4006(Maleimide) | Maleimide | 581 | 591 | 1 mg / 5 mg / 10 mg / 25 mg / 100 mg | |
| BODIPY581/591 AzideQH-40-4006(Azide) | Azide | 581 | 591 | 1 mg / 5 mg / 10 mg / 25 mg / 100 mg | |
| BODIPY 581/591 DBCOQH-40-4006(DBCO) | DBCO | 581 | 591 | 1 mg / 5 mg / 10 mg / 25 mg / 100 mg | |
| BODIPY 581/591 WGAQH-40-4006(WGA) | WGA | 581 | 591 | 1 mg / 5 mg / 10 mg / 25 mg / 100 mg |
需要确认反应形式或检测通道？
光谱与检测条件
参考产品
BODIPY581/591 Succinimidyl EsterQH-40-4006
通道配置与对照
- 核对激发光源和发射滤光片的完整通带，再按实际采集设置运行单染对照。
- 以纯化后的偶联物评价信号、背景和串色；比较不同标记物时保持标记度、样品处理及检测设置一致。
- 峰值波长不足以确定光谱重叠、亮度或补偿量；测量条件按具体产品申请。
BODIPY 581/591 各产品波长
| 产品 / 货号 | 产品形式 | Ex / Em · nm |
|---|---|---|
| BODIPY 581/591 WGAQH-40-4006(WGA) | WGA | 581 / 591 |
| BODIPY 581/591 DBCOQH-40-4006(DBCO) | DBCO | 581 / 591 |
| BODIPY581/591 MaleimideQH-40-4006(Maleimide) | Maleimide | 581 / 591 |
| BODIPY581/591 AzideQH-40-4006(Azide) | Azide | 581 / 591 |
| BODIPY581/591 Succinimidyl EsterQH-40-4006 | NHS Ester | 581 / 591 |
应用与标记路线
BODIPY 581/591 产品形式
按 BODIPY 581/591 的完整名称区分染料，再选择适用的反应端或 WGA 偶联物。含 X 的产品名称作为独立形式保留，其结构和参数按具体货号确认。
Maleimide
可接近的游离巯基
Maleimide
巯基反应端R–SH
游离巯基C–S–R
硫醚连接Maleimide 与游离巯基加成形成含硫醚连接的产物。二硫键中的硫不是可用游离巯基；还原前处理需兼顾样品结构和功能。
Azide
末端炔或 DBCO、BCN 等适用应变炔
CuAAC · Cu(I) 催化
N₃
叠氮染料R–C≡CH
末端炔三唑
共价连接SPAAC · 无铜反应
N₃
叠氮染料R–DBCO
应变炔三唑
共价连接叠氮染料不直接标记普通伯胺或巯基。先确认目标上的炔基类型，再选择铜催化或应变促进的环加成体系。
NHS Ester
蛋白 N 端、赖氨酸及人工引入的伯胺
NHS
活性酯R–NH₂
伯胺CO–NH–R
酰胺连接NHS 酯与伯胺形成酰胺键，水解会消耗活性酯。蛋白上的可用位点通常不止一个，投料比不等于最终标记度。
WGA
可接近的 N-乙酰葡糖胺及唾液酸相关糖链
WGA
荧光偶联物GlcNAc / Sia
GlcNAc / 唾液酸糖链识别结合
非共价识别WGA 为小麦胚芽凝集素。其荧光信号取决于糖链分布和可接近性；固定、通透、温度和孵育时间会改变所见分布，信号不等同于细胞膜总量。
稀释和连接后的光谱检查
BODIPY 染料的结构、溶剂与所连接分子会影响检测表现。储备液加入水相样品后检查浑浊、吸附和聚集，并在最终缓冲液中评价纯化产物。
选型要点
匹配检测通道
根据具体产品的激发、发射参数与仪器光源、滤片或探测器比较；产品名中的数字不替代技术参数。
反应性染料与 WGA 用途
蛋白、多肽或修饰核酸的共价标记选对应反应性形式；糖链识别使用 WGA 偶联物。染料名称本身不确定靶向性。
比较信号与背景
按实际样品滴定产品用量，保持采集和处理条件一致，并设置用途对应的对照。
样品与实验准备
先检查水相相容性
先做小量稀释，保持最终有机溶剂比例一致。出现浑浊、沉淀或明显管壁吸附时，先调整配制与加入方式，再比较投料梯度。
规划反应与纯化
列明目标分子量、浓度、已有反应位点及缓冲添加物，选择能分离目标产物和游离染料的方法。不同反应形式使用各自的产品条件。
保留未标记基线
保留同批未标记样品；纯化后再进行浓度、标记度及功能检测。多色检测使用实际偶联物设置单染参考。
技术文章
WGA 信号与细胞膜轮廓
WGA 标记可接近的糖链；膜轮廓分割需检查连续性，不能把强度直接当作膜总量。
WGA 表面信号与内吞区分
活细胞中的 WGA 可被内吞；胞内信号需结合时间与定位判断。
WGA 固定与通透条件比较
固定和通透会改变糖链可接近性，需分别比较膜轮廓、胞内信号和背景。
SPAAC 前样品与缓冲液检查
目标叠氮用于偶联；游离叠氮修饰试剂和叠氮化钠可能竞争消耗 DBCO。
SPAAC 弱信号与高背景排查
用产物分析区分转化不足与检测偏差，用无叠氮对照排查吸附背景。
Azide 与 DBCO 点击反应配对
末端炔与 Azide 采用 CuAAC；DBCO 与叠氮采用无铜 SPAAC。
巯基状态与还原前处理
半胱氨酸可能处于二硫键或受保护状态；先确认游离巯基，再决定是否还原。
Maleimide 标记前还原剂处理
DTT、β-巯基乙醇会竞争消耗 Maleimide；TCEP 残留也可能干扰反应。
Maleimide 标记产物评价
去除游离染料后测标记度，再检查功能及保存后的信号变化。
CuAAC 与 SPAAC 路线选择
末端炔采用 CuAAC，应变炔采用 SPAAC；确认目标基团后再检查铜与样品的兼容性。
CuAAC 转化率不足排查
反应基团、催化组分和铜结合添加物是低转化率的首要排查项。
点击标记后的纯化与背景评估
用无反应位点对照区分共价标记与吸附，纯化时同时处理游离染料和催化组分。
NHS 标记前缓冲液检查
Tris、甘氨酸会消耗 NHS 染料；BSA、明胶需与目标蛋白分离，普通换液不能代替这一步。
NHS 标记信号不足排查
先排查 NHS 水解和含胺添加物，再区分标记不足、样品损失与结合活性下降。
抗体标记度（DOL）计算与质量评价
用吸收校正计算 DOL，区分投料比与实际标记量，再结合回收率和结合活性评价偶联物。
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产品资料申请
按货号申请说明书、SDS 或批次 CoA；申请 CoA 时请提供瓶签批号。
产品说明书
产品用途、配制、使用条件与储存要求。
批次分析证书（CoA）
对应批次的检验项目与结果。
安全数据表（SDS）
安全操作、储存及应急处置信息。
常见问题
如何选择产品形式？
先确认样品已有反应位点或需要的识别方式，再选择相应反应性染料或已有偶联物。具体货号分别使用其配制、反应与保存要求。
增加染料投料能持续提高信号吗？
需实测纯化后的标记度和信号。高局部标记密度可能改变荧光读数，应同时评价背景、回收和样品功能。
如何比较两种标记产物？
保持目标浓度、采集设置及样品处理一致，结合标记度比较特异信号、阴性背景、回收率和样品功能。单看游离染料或一次终点强度不能评价全部性能。
标记度计算需要哪些参数？
需使用具体货号的分子量、适用消光系数及蛋白吸收校正参数，并先清除游离染料。未公开的参数可在产品资料标签按货号申请。